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Descrição

• Reagente de Bradford (pronto-para-uso)

• Para determinação da concentração de proteínas

• Código: 13-1309-05

• Volume: 500 mL

• (acompanha 4 mg de BSA)

• Armazenamento: 2-8°C

 

Descrição do produto:

• O Reagente de Bradford deve ser usado para determinar a concentração de proteínas em solução. O procedimento é baseado na formação de um complexo entre o corante, Brilliant Blue G, e proteínas em solução. O complexo formado entre a proteína e o corante provoca uma mudança na absorção máxima nas leituras entre 465 e 595nm. O valor de absorção é proporcional à concentração de proteína presente. O Reagente de Bradford não requer diluição e é ideal para microensaios, multiensaios e ensaios padrões. A linearidade do ensaio é de 0,1-1,4 mg/mL de proteína, usando BSA (albumina bovina sérica) como proteína padrão.

• O Reagente de Bradford é compatível com agentes redutores, que são comuns para estabilização de proteínas em solução. Outros ensaios para quantificação de proteínas (Lowry e BCA) não são compatíveis com tais agentes. O Reagente de Bradford deve ser utilizado no lugar destes ensaios se agentes redutores estiverem presentes. Entretanto, o Reagente de Bradford só é compatível com concentrações baixas de detergentes (vide tabela de compatibilidade).  Se a amostra de proteína a ser utilizada possui detergente presente no tampão, sugere-se a determinação através do ensaio de BCA.

 

Reagente:

 

• O produto consiste em Brilliant Blue G com ácido fosfórico e metanol. Frasco com 500 mL mL é suficiente para, pelo menos 5.000 determinações. Acompanha 4 mg de padrão de proteína liofilizada (BSA) para ser diluída para a concentração de 1mg/mL em água deionizada.

Reagentes e equipamentos requeridos (dependendo do formato do ensaio)

– Espectrofotômetro capaz de realizar leitura de absorbância na faixa de 465 e 595 nm.

– Tubos de ensaio, 13 x 100 mm

– Cuvetas de 2,0 mL (espectrofotômetro de cuvetas)

 

Armazenamento e estabilidade:

 

• O produto se armazenado entre 2 e 8ºC é estável por 1 ano. A BSA reconstituída é estável por 60 dias entre 2 a 8ºC ou 6 meses entre -20 a -70ºC.

Procedimento:

1. Reconstituição do padrão de BSA

Para reconstituir o padrão de Albumina bovina sérica, adicionar 4 mL de água deionizada e agitar até dissolução completa.  Se o padrão não for utilizado em 60 dias aconselha-se congelar em -20°C.

2. Protocolo sugerido:

2.1 Preparar entre 3 a 5 diluições da proteina padrão (BSA). A linearidade para o ensaio com BSA é de 0,1 a 0,9 mg/mL.

2.2 Pipetar 100 mL de cada padrão e amostra nos tubos recomendados. Ensaios com proteína normalmente são testados em duplicata ou triplicata.

2.3 Adicionar 5,0 mL da solução de Bradford pronta-para-uso e leve os tubos para agitação no vôrtex.

2.4 Incubar em temperatura ambiente pelo menos 5 minutos. A absorbância em 595 nm poderá se ver aumentada com o decorrer do tempo, levando a resultados não desejados. Assim os ensaios deverão ser finalizados no máximo em uma hora.

2.5 Realizar as leituras no espectrofotômetro (595 nm) como de costume, zerando o aparelho com água deionizada.

 

Referências:

1. Bradford, M.M., Anal. Biochem., 72, 248 (1976).

2. Compton, S.J. et al., Anal. Biochem., 151, 369-374 (1985).

3. Friedenauer, D. et al., Anal. Biochem., 178, 263-268 (1989).

4. Rubein, R.W. et al., Anal. Biochem., 83, 773-777 (1977).

5. Sedmak, J.J., and Grossberg, S.E., Anal. Biochem., 79, 544 (1977).

6. Sokuttgerber, A.G. et al., Anal. Biochem., 179, 198-201 (1989).

7. Tal, M. et al., J. Biol. Chem., 260, 9976-9980 (1985).

 

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